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端粒酶活性-檢查項目-大眾養生網

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端粒酶活性

基本信息

  • 專科分類: 腫瘤科
  • 檢查分類: 免疫檢查
  • 適用性別: 男女均適用
  • 是否空腹:  非空腹
  • 手術參考價: 32元
  • 科 室: 腫瘤科

端粒酶活性檢查簡介

端粒是真核生物染色體末端的一種特殊結構,由一富含鳥嘌呤的重復DNA序列及其相關蛋白組成。端粒是保護染色體末端穩定必不可少的結構。端粒長度的維持需要端粒酶活性的存在。永生細胞和腫瘤細胞能夠長期生存,端粒酶起到了重要的作用。端粒酶是由RNA和蛋白體組成的復合體,屬一種專一的依賴RNA的逆轉錄酶,能以自身的RNA為模板,從頭合成染色體末端的端粒DNA,彌補細胞分裂時端粒DNA的丟失,維持端粒的長度,保持染色體的動態平衡,使細胞獲得永生化。自1994年Kim建立了高敏感度的、以PCR為基礎的檢測端粒酶的方法以來,端粒酶引起了人們的廣泛關注。人們發現,端粒酶與細胞的增生、分化和不死性有著極為密切的關系,已成為目前腫瘤和衰老基礎研究的熱點之一。

端粒酶活性檢查過程

基因組DNA為0.1μg;緩沖液含50mmol/L氯化鉀,10mmol/LTris-HCl(pH8.4),1.5mmol/L氯化鎂,100μg明膠;每一引物為0.25μmol/L;dATP,dCTP,dGTP,dTIP各為200μmol/L;DNA聚合酶為2.5U,終體積為100μl。加數滴液體石蠟防止蒸發。
反應周期:①變性:90℃30~60s;②引物和模板的退火溫度:40~60℃30~60s;③延伸:72℃1~2min。經反復循環30~40次,最后1次72℃引物延伸7min后終止。除去液體石蠟后,產物可供分析。經瓊脂糖凝膠電泳后,用溴乙錠染色,經紫外燈照射可見預料擴增長度的熒光條帶。產物也可與放射標記或非放射標記的寡聚核苷酸探針行Southern印跡雜交或點漬印跡雜交。如用PCR自動儀則更為方便,將反應試劑、DNA模板及Taq-DNA聚合酶加入試管后,放進已調好程序,即所需變性→退火→延伸各自的溫度和時間及循環次數的自動儀中進行反應,即可獲得滿意的擴增產物。

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