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(1)熒光抗體試劑中存在凝聚IgG的影響,凝聚IgG可以和B細胞表面Fc受體結合出現假陽性,因此,為避免出現凝聚IgG須注意:
①不能使用F/P克分子比值過高的熒光抗體,一般以1~3為宜。
②含低濃度蛋白的熒光抗體低溫保存不穩定,一般不應低于2mg/ml。
③低溫保存的熒光抗體不可反復凍融,使用前150000r/min離心30min,除去凝聚物。
(2)活的淋巴細胞作免疫熒光染色時,在全部試劑中(標記抗體、Hank液等)均需加NaN3,以限制細胞膜的流動性。否則會出現帽狀熒光和吞噬現象,熒光細胞實際數下降。
(3)用抗IgG熒光抗體染色時,可由于標本中含有抗原一抗體(IgG型)免疫復合物與B細胞表面Fc受體結合,表現為熒光陽性。為此,有人建議用熒光標記抗F(ab)2抗體染色,以排除Fc受體被著染。
(4)如果當天不能觀察標本,則將細胞懸于熒光抗體保存液中,4℃存放,次日計數。
近年來由于抗B細胞表面特異分子(CD19、CD20等)單克隆抗體的問世,因而人們開始傾向于應用熒光素標記的抗CD19或CD20的單克隆抗體直接與外周血淋巴細胞反應;或用抗CD19和CD20的單克隆抗體(第一抗體)先與淋巴細胞反應,再與熒光素標記的兔或羊抗鼠IgG(第二抗體)結合,熒光顯微鏡下計數或流式細胞術來計數外周血B淋巴細胞。
暫無禁忌人群。
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