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取材:血液
血氨的測定原理:血漿氨的酶法測定基于下列反應:
在過量α-酮戊二酸、NAD(P)H和足量谷氨酸脫氫脫氫酶(GLDH)條件下,酶促反應的速率,即NAD(P)H轉變成NAD(P)+使340nm吸光度的下降速率與反應體系中氨的濃度呈正比關系。
試劑:全部試劑必須用去氨水制備。去氨水用蒸餾水經氫型陽離子交換樹脂處理獲得。
(1)66.7mmol/LKH2PO4溶液:取9.12gKH2PO4溶入去氨水中,定溶到1L,4℃保存。
(2)66.7mmol/LNa2HPO4溶液:取9.51gNa2HPO4溶解并加去氨水到1L,4℃保存。
(3)pH8.0(±0.05),66.7mmol/L磷酸鹽緩沖液(PB):取5ml“1”液及95ml“2”液,混合,4℃保存,穩定3周。
(4)310mmol/Lα-酮戊二酸:取0.45gα-酮戊二酸,溶于5ml去氨水中,用3mol/L氫氧化鈉調pH至接近5.0時,改用0.1mol/L氫氧化鈉調pH至6.8(±0.01),切勿調得過堿,因高pH可破壞α-酮戊二酸,以去氨水稀釋到10ml,4℃穩定10天;
(5)NADPH貯存液:稱約10mgN-ADPH(-20℃、干燥器保存)溶于1mlPB中取出50μl,以PB稀釋到5ml為工作液,以PB調零,1cm光徑,在340nm波長讀NADPH工作液的吸光度,計算NADPH貯存液中實際濃度:
6.22為NADPH的毫摩爾吸光系數,據上式計算結果確定制備GLDH工作液中加入NADPH貯存液的量,使達到149μmol/L。
(6)GLDH工作液:根據GLDH酶制品(-20℃干燥器中保存)的比活,稱出酶活力為992U的相應量(如比活為50U/mg蛋白,則稱20mg),如GLDH在甘油中,可按U/ml吸出992U的相應體積,置50ml量瓶中,稱入ADP(-20℃,干燥器中保存)15mg,吸入計算量的NADPH貯存液,以PB稀釋到50ml,4℃保存可穩定7天;
(7)氨標準貯存液,100mmol/L:稱取(NH4)2SO4660.7mg,溶于去氨水定容到100ml,4℃保存;
(8)氨標準應用液:用去氨水分別稀釋貯存液成25、50、100、及150μmol/L。
操作方法:所用分光光度計需配有37℃恒溫比色系統及340nm波長。如用自動分析儀,可根據本法反應條件自行設計,樣品及試劑用量按比例減少。操作見表1,按B、S、U管先后順序進行。
混勻,于10s時讀A10s于70s時讀A70s,求各管的△A,即△A=A10s-A70s。
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三級甲等綜合醫院國營
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1965年畢業于新疆醫學院臨床醫療學,擅長內科心血管疾病的診斷與治療,曾獲自治區優秀專家稱號。全國
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